植物染色體原位雜交技術的應用非常廣泛。例如,它可以用來研究植物基因組的結構和功能,包括基因定位、染色體重組、基因表達和基因組演化等方面。此外,原位雜交檢測,該技術還可以用來檢測植物中的染色體異常,如染色體缺失、重復和易位等。
植物染色體原位雜交技術的優點在于它可以直接觀察到染色體上的目標DNA序列,熒光原位雜交,而不需要進行PCR擴增或測序等操作。此外,該技術還可以同時檢測多個目標DNA序列,從而提高檢測效率和準確性。
原位雜交技術(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術。使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標本。也可以檢測組織芯片。
菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,湖北原位雜交,使濾膜均勻濕潤,染色體原位雜交,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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