原位雜交雜交液注意事項:
(1)雜交液內除含一定濃度的標記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。
(2)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。甲酰胺可使Tm降低,雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的雜交溫度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態結構的破壞以及標本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達到提高雜交率的目的(尤其對雙鏈核酸探針)。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等,都是為了阻斷探針與組織結構成分之間的非特異性結合,水稻原位雜交測試服務,以減低背景。
原位雜交的應用范圍:
①細胞特異性mRNA轉錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究;
②感1染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳1頭狀瘤1病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測;
④基因在染色體上的定位;
⑤檢測染色體的變化,如染色體數量異常和染色體易位等;
⑥分裂間期細胞遺傳學的研究,如遺傳病的產前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫1瘤的診斷和生物學劑量測定等。
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