結1核病是嚴重威脅人類健康的傳1染性疾病,每年約有200萬人死于該病,其死1亡率在傳1染性疾病中僅低于艾1滋病,隨著醫1療診斷技術的迅猛發展,結1核病病理診斷經歷了單一形態學和聯合特殊染色,到如今利用分子病理基因檢測技術進行準確診斷的三個階段。
我科早在全1國建立了系統性結1核病分子病理診斷技術的平臺,率1先將分子病理診斷技術在結1核病中應用并推廣,解決了傳統病理對菌陰肺結1核及肺外結1核病的診斷率低、結1核病與非結1核分枝桿1菌病無法鑒別以及耐藥結1核病無法診斷等難題。同時,我科作為中華醫學會結1核病學分會金1牌病理培訓基地,負責組織制定了結1核病病理診斷規范、培訓了大量的專1業技術人員,為形成結1核病病理學綜合診治新模式做出了卓1越貢獻!
菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜
(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,植物葉片原位雜交技術服務,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。
(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。
(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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