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胞胞外囊泡zetaview檢測-武漢科銳諾生物

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iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation,同位素標記相對和絕1對定量)是由AB SCIEX公司研發的一種體外同重同位素標記的相對與絕1對定量技術。該技術使用8種(或4種)不同的同位素試劑來同時標記和比較8種(或4種)不同的蛋白質樣品。這些試劑由3個不同的化學標簽組成:報告部分,肽反應部分和平衡部分。報告部分為客戶可按需選擇標記個數,肽反應基團將iTRAQ標簽與肽段的N-端基團和每個賴氨酸側鏈相連,胞胞外囊泡zetaview檢測,可標記所有酶解肽段,平衡部位可保證iTRAQ試劑標記的不同樣本的同一肽段具有相同的質荷比,因此改變任一iTRAQ試劑,不同同位素在標記同一多肽后在一級質譜檢測,分子量都完全相同。而在串聯質譜中,同重元素標記肽段平衡基團在二級質譜發生中性丟失。信號離子表現為不同質荷比的峰,因此,根據波峰的高度及面積,可以得到蛋白質的定量信息。

外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體于綿羊網織紅細胞中被發現, 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中 。

所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳1汁中。 有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精1確分子機制剛剛開始研究。 外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。

外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發表還是各類基1金的申請,外泌體相關研究表現都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個重要問題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質量如何?

現階段,對外泌體進行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標物。之前我們已經對外泌體電鏡進行了總結,今天我們來看看外泌體的粒徑分析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對每個顆粒的布朗運動進行追1蹤和分析,結合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NT A技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。

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