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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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| 先生： |
原位雜交是一種非常重要的技術(shù)，因?yàn)樗梢栽诩?xì)胞或組織的自然環(huán)境中研究基因表達(dá)和調(diào)控。它可以幫助科學(xué)家們了解基因在特定組織或細(xì)胞類型中的作用和功能，以及在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中的變化。此外，這項(xiàng)技術(shù)還可以用于檢測(cè)基因變異和染色體異常，以及監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡。
雖然原位雜交是一項(xiàng)非常有用的技術(shù)，但它也有一些限制。首先，探針的特異性可能受到干擾，導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。其次，探針的數(shù)量和位置可能受到細(xì)胞或組織中其他成分的影響。此外，這項(xiàng)技術(shù)的操作比較繁瑣，需要專門的技術(shù)和設(shè)備，熒光原位雜交，而且需要大量的實(shí)驗(yàn)和對(duì)照才能獲得可靠的結(jié)果。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤(rùn)，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，原位雜交檢測(cè)，在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí)，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
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第3年
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