染色體原位雜交-貝科新肽科技公司-原位雜交
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武漢貝科新肽科技有限公司
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原位雜交技術的技術流程
原位雜交技術的技術流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應和信號檢測等步驟。樣本處理包括組織或細胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟,目的是保持組織或細胞的原始結構和核酸序列的完整性。探針制備包括標記探針、純化和變性等步驟,目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應包括預雜交、雜交和洗脫等步驟,目的是使探針與目標核酸序列形成雙鏈復合物。信號檢測包括顯色反應、熒光染色和性同位素標記等步驟,染色體原位雜交,目的是可視化目標核酸序列的分布。

這一原理對于檢測一個特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個細胞里具體表達位置非常有用。該技術早應用于60年代末期,植物原位雜交,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術已被廣泛應用,例如與細胞內RNA進行雜交以觀察該組織細胞中特定基因表達水平。原位雜交能在成分復雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,原位雜交檢測,因此對于那些細胞數量少且散在于其他組織中的細胞內DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細胞的形態,更能準確地反映出組織細胞的相互關系及功能狀態。

在研究DNA分子原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,原位雜交,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位

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