





外泌體分離提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速離心法;
適用于細胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法;
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;
3、超濾提取法;
適用于細菌培養液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,做進一步的提取。
外泌體是細胞外囊泡的一種,其膜來源與粒徑范圍與細胞外囊泡相似,胞外囊泡透射電鏡測試服務,電鏡下,顯示出典型的茶托狀超微結構。實際操作中,通過常規的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態、粒徑、表面分子標記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態鑒定)、NTA檢測(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標志物)。NTA檢測作為外泌體鑒定的經典方法之一,可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質量較好,純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質量,對每一個樣品,都會進行3次技術重復。檢測周期為2-3個工作日,可當天到樣當天出結果。

外泌體的提取方式:
1、離心法:此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。
2、過濾離心:這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法:用此種方法分離到的外泌體純度較高,但是前期準備工作繁雜
4、免1疫磁珠法:這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單,但生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性。
5、色譜法:此種方法分離出的外泌體大小均一,但設備特殊,應用不廣泛。

透射電鏡作為鑒定外泌體的金標準,一直是科銳諾生物主營的業務之一。透射電鏡點分辨率可以達到0.1nm,非常適合用來觀察外泌體類囊泡。客戶只需要寄送新鮮或者凍存的外泌體樣品,我們負責從制片到觀察的全套檢測服務。一個樣品提供2個放大倍數,10-15張照片。檢測周期為7個工作日。
在透射電鏡基礎上,用外泌體標記蛋白對外泌體進行免1疫標記,利用膠體金標記出外泌體表面的特定抗原的位置。結合透射電鏡形態學定性的特點,同時確定外泌體標記蛋白的位置。這樣同時從形態學及免1疫學原理上驗證外泌體。這樣數據結果中既可以獲得經典形態的外泌體,又可以定性及定位外泌體表面的標志蛋白。這樣具有更充分的說服力。

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